Search results

Search:
in the keywords: ABCG2

Sort By:

Limit search:

Optimization of Western blotting analysis for the isolation and detection of membrane xenobiotic transporter ABCG2

100%

Szczygieł M., Markiewicz M., Szafraniec M., Zuziak R., Urbańska K., Fiedor L.

2017

vol. 64

issue 3

437-443

All organisms are exposed to numerous stress factors, which include harmful xenobiotics. The diversity of these compounds is enormous, thus in the course of evolution diverse biological defense mechanisms at various levels of organization have developed. One of them engages an evolutionarily conserved family of transporters from the ABC superfamily, found in most species - from bacteria to humans. An important example of such a transporter is the breast cancer resistance protein (BCRP/ABCG2), a typical integral membrane protein. It plays a key role in the absorption, distribution and elimination of a wide variety of xenobiotics, including drugs used in chemotherapy, and is involved in multidrug resistance. It also protects against phototoxic chlorophyll derivatives of dietary origin. BCRP is a hemitransporter which consists of one transmembrane domain, made of six alpha-helices forming a characteristic pore structure, and one ATP-binding domain, which provides the energy from ATP hydrolysis, required for active transport of the substrates. The isolation of BCRP is still not an easy task, because its insolubility in water and the presence of membrane rafts pose serious methodological and technical challenges during the purification. The aim of this study was to optimize the methods for detection and isolation of BCRP-enriched fractions obtained from animal tissue samples. In this report we describe an optimization of isolation of a BCRP-enriched membrane fraction, which is suitable for further protein quantitative and qualitative analysis using the molecular biology tools.

Analiza częstości występowania polimorfizmu C421A genu ABCG2 w przypadkach raków żołądka w regionie łódzkim

63%

Wosiak A., Sałagacka A., Balcerczak E., Żebrowska M.

Folia Medica Lodziensia

2014

vol. 41

issue 1

33-45

Introduction: In the present thesis the association between the variants of C421A polymorphism of ABCG2 gene and the risk of gastric cancer development were searched. The occurrence of polymorphic variant 421 C > A leads to the weakening of the activity of BCRP protein which is encoded by the ABCG2 gene. Due to the presence of BCRP protein in the gastrointestinal tract and its protective role the reduction of the amount of BCRP protein which is the result of the tested polymorphism may lead to the increased predisposition to cancer development. The main aim of this study was to compare the frequency of C421A polymorphism genotypes between the examined and the control groups. Material and methods: The material for the research consisted of DNA isolated from 19 scraps of the tumor tissue taken from patients with gastric cancer and 44 samples of peripheral blood collected from healthy individuals. DNA was extracted from the tested materials by microcolumn-method. Then the obtained samples of DNA were subjected to polymerase chain reaction (PCR) to amplify the ABCG2 gene fragment. To determine C421A polymorphism genotypes ABCG2 gene fragments amplified by PCR the were analyzed by RFLP method using an digestive enzyme MseI. Results: All the examined patients irrespectively of gender, age and clinical stage showed the presence of genotype C/C, which is homozygous wild for C421A polymorphism. All 44 persons from the control group also showed the presence of genotype C/C. Conclusions: No differences in the occurrence of C421A genotypes between the study group and the control group were found. In both the groups 100% of the results for the C/C genotype were obtained. Due to the presence of only one genotype (C/C) for the C421A polymorphism in all the patients no relationship between the occurrence of C421A genotypes and tumor stage, age and gender of the examined patients was evaluated. Although no correlation between the C421A polymorphism and the susceptibility to the development of gastric cancer was found the exclusion of the participation of BCRP protein in the pathogenesis of this disease is possible only after the increase of the number of analyses on larger groups of respondents.

Wstęp: W niniejszej pracy poszukiwano związku między występowaniem wariantów dla polimorfizmu C421A w obrębie genu ABCG2, a zwiększonym ryzykiem rozwoju raka żołądka. Występowanie wariantu polimorficznego 421 C>A prowadzi do zmniejszonej aktywności białka BCRP, kodowanego przez gen ABCG2. Ze względu na obecność białka BCRP w obrębie przewodu pokarmowego i związaną z tym rolę ochronną, zmniejszenie ilości białka BCRP będące efektem badanego polimorfizmu może zwiększać predyspozycję do rozwoju raka. Głównym celem pracy było porównanie częstości występowania genotypów dla polimorfizmu C421A pomiędzy grupą badaną a kontrolną. Materiał i metody: Materiał do badań stanowiło DNA wyizolowane z 19 mrożonych skrawków tkankowych pobranych od pacjentów z rakiem żołądka i z 44 prób krwi obwodowej pobranych od osób zdrowych. Izolację DNA z badanych materiałów biologicznych przeprowadzono wykorzystując metodę kolumienkową. Następnie, uzyskane próby DNA poddawano reakcji łańcuchowej polimerazy, by powielić badany fragmentu genu ABCG2. Celem określenia genotypów dla polimorfizmu C421A na mnożony w reakcji PCR fragment genu ABCG2 poddawano analizie metodą RFLP z użyciem enzymu MseI. Wyniki: U wszystkich badanych, bez względu na płeć, wiek oraz stopień zaawansowania klinicznego raka żołądka, wykazano obecność genotypu C/C, czyli homozygoty dzikiej dla polimorfizmu C421A. Wśród 44 osób z grupy kontrolnej również u wszystkich stwierdzono genotyp C/C. Wnioski: Nie wykazano różnic w częstości występowania genotypów dla polimorfizmu C421A między grupą badaną i kontrolną. W obydwu grupach zaobserwowano tylko jeden z możliwych genotypów dla badanego polimorfizmu - genotyp C/C. Z uwagi na stwierdzenie u wszystkich badanych osób z obu grup tylko genotypu C/C dla polimorfizmu C421A nie oceniano zależności między występowaniem genotypów C421A a stopniem zaawansowania nowotworu, wiekiem i płcią badanych osób. Mimo, że nie wykazano korelacji między polimorfizmem C421A a podatnością na rozwój raka żołądka, jednoznaczne wykluczenie udziału białka BCRP w patogenezie tej jednostki chorobowej jest możliwe dopiero po przeprowadzeniu większej ilości analiz na większych grupach badanych.

Refine search results

1 Acta Biochimica Polonica

1 Folia Medica Lodziensia

1 2017

1 2014

1 Balcerczak E.

1 Fiedor L.

1 Markiewicz M.

1 Sałagacka A.

1 Szafraniec M.

1 Szczygieł M.

1 Urbańska K.

1 Wosiak A.

1 Zuziak R.

1 Żebrowska M.

Search results

Optimization of Western blotting analysis for the isolation and detection of membrane xenobiotic transporter ABCG2

Analiza częstości występowania polimorfizmu C421A genu ABCG2 w przypadkach raków żołądka w regionie łódzkim