Enzymy restrykcyjne ze względu na istotę swojego działania mogą być źródłem informacji na temat miejsca lub specyficzności sekwencyjnej wiązania substancji do DNA. Z drugiej strony, działanie enzymów może być zaburzone przez związki mające zdolność do metylacji zasad DNA. Cecha ta może być wykorzystywana do pierwotnej selekcji związków potencjalnie genotoksycznych. W pracy badano działanie enzymu restrykcyjnego £coRI na DNA, które było uprzednio inkubowane ze związkami fosforoorganicznymi. DNA plazmidu pUC19 0 stężeniu 78 μg/ml był inkubowany przez 72 h z insektycydami fosforoorganicznymi parationem i metyloparationem oraz z ich głównymi metabolitami, odpowiednio paraoksonem 1 metyloparaoksonem o stężeniu 300 μM. Po inkubacji nie związane insektycydy były usuwane przez ultrafiltrację, a DNA poddawano 1 h inkubacji z endonukleazą restrykcyjną EcoRI i analizowano przez elektroforezę w 0.8% żelu agarozowym. Związek fosforoorganiczny metyloparaokson powodowa! rozwinięcie superskręconego DNA plazmidu pUC19, a działanie EcoRI na ten DNA było zaburzone, co znalazło swe odbicie w zmienionym obrazie elektroforetycznym.
Badano zdolność indukowania uszkodzeń DNA plazmidu pUC19 przez powszechnie stosowany insektycyd fosforoorganiczny metyloparation i jego główny metabolit metyloparaokson po 72 h inkubacji z tymi związkami. Stosowano metodę elektroforezy w żelu agarozowym i analizowano zmianę intensywności pasm odpowiadających dwóm formom konformacyjnym plazmidu - kolistej superskręconej (CCC) i kolistej otwartej (OC). Metyloparation, w przeciwieństwie do swego metabolitu, nie wywoływał zmian konformacyjnych plazmidowego DNA. Działanie metyloparaoksonu powodowało przejście konformacyjne DNA z formy CCC do OC. Otrzymane rezultaty wskazują na potencjalną zdolność metyloparaoksonu do wywoływania uszkodzeń DNA in vivo.
Genotoxicity of anticancer drugs is of a special interest due to the risk of inducing secondary malignancies. Vitamin C (ascorbic acid) is a recognized antioxidant and, since human diet can be easily supplemented with vitamin C, it seems reasonable to check whether it can protect against DNA-damaging effects of antitumor drugs. In the present work the ability of vitamin C to modulate cytotoxic and genotoxic effects of a cisplatin analog, conjugate (NH3)2Pt(SeO3), in terms of cell viability, DNA damage and repair in human lymphocytes was examined using the trypan blue exclusion test and the alkaline comet assay, respectively. The conjugate evoked a concentration-dependent decrease in the cell viability, reaching nearly 50% at 250 μM. (NH3)2Pt(SeO3) at 1, 10 and 30 μM caused DNA strand breaks, measured as the increase in the comet tail moment of the lymphocytes. The treated cells were able to recover within a 30-min incubation in a drug-free medium at 37°C. Vitamin C at 10 and 50 μM diminished the extent of DNA damage evoked by (NH3)2Pt(SeO3) but had no effect on the kinetics of DNA repair. The vitamin did not directly inactivate the conjugate. Lymphocytes treated with endonuclease III, which recognises oxidised pyrimidines, displayed a greater tail moment than those untreated with the enzyme, suggesting that the damages induced by the drug have, at least in part, an oxidative origin. Vitamin C can be considered a potential protective agent against side effects of antitumor drugs, but further research with both normal and cancer cells are needed to clarify this point.
Pesticides are widely used in agriculture, food production and household. Due to the broad spectrum of their activity, their biological action is extensively investigated. We assessed the genotoxidty of methylparaoxon - the main metabolite of commonly used organophosphorus insecticide, methylparathion. Freshly isolated human peripheral blood lymphocytes were incubated for 1 h with methylparaoxon at 37° C, and then, were incubated in methylparaoxon-free medium to examine DNA repair. Alkaline single cell gel electrophoresis (the comet assay) was used to assess DNA damage and repair. Methylparaoxon induced moderate DNA damages that were almost completely repaired after 60 min. Obtained results suggest that methylparaoxon could induce single-strand breaks in DNA both directly and by methylathion of DNA bases.
JavaScript is turned off in your web browser. Turn it on to take full advantage of this site, then refresh the page.